INSTRUKSI BUDIDAYA BAKTERI BIOLUMINESEN

MENUMBUHKAN BAKTERI BIOLUMINESEN

⌬ Saat membuat kultur bakteri cair, sebaiknya gunakan sedikit bakteri kultur segar seukuran setengah cm untuk menginokulasi nutrisi kaldu cair. Kami menyediakan 2 vial bakteri bioluminesen berukuran 5 ml dan nutrisi yang cukup (Agar) untuk menumbuhkan beberapa kultur! 

⌬ Untuk menumbuhkan bakteri tambahan, kami menyertakan 1 tabung MEDIA AGAR AMPICILLIN bubuk (nutrisi agar yang cukup untuk 7 kultur cawan) dan 3 tabung MEDIA KALDU AMPICILLIN bubuk (nutrisi cair yang cukup untuk 3 kultur cair berukuran 250 ml) 

⌬ Semua ini hanya dari satu vial kecil bakteri berukuran 5 ml! 

ISI PAKET:

⌬ 1 botol kaca 250 ml

⌬ 1 tabung AGAR GEL AMP

⌬ 3 tabung AGAR KALDU CAIR AMP

⌬ 7 cawan Petri

⌬ 10 sarung tangan Nitril

⌬ 5 loop inokulasi steril

⌬ 1 gelas ukur kerucut 50 ml

⌬ 5 pipet sekali pakai

⌬ 1 vial H2O steril 

⌬ 2 vial bakteri e.coli non-patogen (1 tambahan!)

     - plasmid vibrio fischeri yang dimodifikasi PJE202

⌬ LANGKAH 1: MEMBUAT CAWAN AGAR

⌬ Langkah ini sangat penting untuk menumbuhkan lebih banyak bakteri. Anda harus menyiapkan wadah nutrisi agar bakteri dapat tumbuh dan berkembang biak, sehingga Anda dapat mengumpulkan lebih banyak bakteri untuk digunakan lebih lanjut dalam kultur cair. 

• Tuangkan isi satu tabung berlabel MEDIA AGAR LB AMPICILLIN ke dalam botol kaca 250 ml. (Ini adalah Agar untuk menuangkan cawan)
• Tambahkan 150 ml air keran ke dalam botol kaca menggunakan gelas kerucut berlabel MEASURE (3 tabung - masing-masing 50 ml)
• Kocok hingga rata dan masukkan botol kaca ke dalam microwave dengan tutup yang tidak diputar dan diletakkan sedikit di atasnya. 
• JANGAN MEMUTAR TUTUPNYA KENCANG-KENCANG DI DALAM MICROWAVE.
• Panaskan botol di microwave selama beberapa detik sekali waktu (5-10 detik) dan berhati-hatilah agar isinya tidak mendidih berlebihan. 
• Buka microwave dan biarkan botol selama beberapa detik agar dingin. 
• Lanjutkan memanaskan di microwave dalam interval singkat tanpa mendidih selama 2-5 menit atau sampai cairan menjadi kuning jernih tanpa partikel yang terlihat.
• Keluarkan botol dari microwave dan biarkan dingin hingga mencapai suhu hangat kuku (20-30 menit).
• Selagi botol masih hangat, tuangkan ke cawan Petri satu per satu.
• Lepaskan tutup setiap cawan dan tuangkan Agar secukupnya untuk menutupi bagian bawah cawan (kedalaman 1-2 mm).
• Pasang kembali tutupnya dengan lembut dan biarkan cawan dingin pada suhu ruangan setidaknya selama satu jam. Agar akan memadat saat dingin.

⌬ LANGKAH 2: MEMBUAT CAWAN AGAR BAKTERI (7 Cawan)

• Menggunakan Pipet, tambahkan 4 tetes H2O steril ke dalam vial berlabel BAKTERI LYOPHILIZASI. Putar tutupnya dan kocok selama beberapa detik.
• Tambahkan semua bakteri ke SALAH SATU cawan gel Agar yang telah disiapkan menggunakan Pipet.
• Oleskan dan sebarkan bakteri secara lembut di sekeliling cawan menggunakan loop inokulasi steril.
• Berhati-hatilah agar Agar tidak pecah. 
• Geser loop inokulasi ke berbagai area untuk menumbuhkan koloni yang besar.
• Pasang kembali tutup pada Cawan Gel Agar dan biarkan air mengering / menguap sebelum disimpan. 
• Balikkan cawan (sisi Agar menghadap ke atas) agar kondensasi tidak menetes dari tutup ke Agar.
• Biarkan cawan diinkubasi dan tumbuh pada suhu ruangan (18-20°C) selama 12-18 jam. 
• Anda akan melihat koloni bakteri berwarna putih yang menunjukkan pertumbuhan.
• Periksa bioluminesensi setelah 12 jam dengan memaparkan cawan kultur ke dalam kegelapan.
• Setelah cawan agar bakteri mulai bercahaya, cawan tersebut dapat digunakan untuk mengoleskan ke 6 Cawan Gel Agar lainnya dan membuat 3 Kultur Cair.
• Hindari meletakkan bakteri di area dengan suhu melebihi 30°C atau protein yang bertanggung jawab atas bioluminesensi akan terdenaturasi dan berhenti bercahaya.
• Anda dapat menyimpan cawan di dalam kulkas (4°C) hingga 2 minggu.

CATATAN TAMBAHAN

⌬ Vial bakteri yang disediakan telah melalui proses pengeringan beku dan aman untuk dikirim pada suhu ruangan, tetapi harus disimpan di dalam freezer setelah tiba. 

⌬ Jangan pernah menyimpan media agar yang telah disiapkan atau kultur bakteri yang telah diinokulasi di dalam freezer. 

⌬ Hindari meletakkan bakteri di area dengan suhu melebihi 30°C atau protein yang bertanggung jawab atas bioluminesensi akan terdenaturasi dan berhenti bercahaya. 

⌬ Bekerjalah di lingkungan steril dan kenakan masker serta sarung tangan untuk menghindari kontaminasi kultur. Agar adalah media kaya nutrisi dan dapat menumbuhkan berbagai jenis bakteri. Ingatlah bahwa Anda hanya mencoba menumbuhkan SATU jenis!